液相色譜儀由高壓液體泵分離系統(tǒng)經驗、檢測(cè)器及液相色譜柱(含柱溫控制系統(tǒng))等三部分組成。其中液相色譜柱是液相色譜工作的關(guān)鍵長效機製,液相色譜柱的性能直接關(guān)系到分離分析的準(zhǔn)確性與適用性進一步意見。
液相色譜柱的分類方法很多,可按鍵合相類型實現了超越、用途(分析型與制備型)發揮重要帶動作用、基質(zhì)種類等進(jìn)行分類開拓創新。
1 處理、硅膠基質(zhì)柱(4大類)
目前重要意義,分析型液相色譜柱多為硅膠基質(zhì)柱,細(xì)分為:
高純硅膠柱:以高純度硅烷化硅膠(Silica)為填料,應(yīng)用范圍較廣高產,但只能在PH2.0-7.5,小于60度的條件下使用建立和完善。又由于強(qiáng)極性硅羥基(Si-OH)的次級(jí)保留效應(yīng)較強(qiáng)問題分析,所以應(yīng)用受到局限,已被鍵合相柱所取代促進善治。
反相硅膠柱:是以硅烷化硅膠為基質(zhì)講故事,表面鍵合弱極性官能團(tuán)的固定相。目前多用C18(ODS)、C8(MOS)置之不顧、C4(B)多樣性、C6H5(phenyl,苯基)等試驗。用于分離大多數(shù)有機(jī)化合物規模,應(yīng)用范圍廣。
正相硅膠柱:是以硅烷化硅膠為基質(zhì)新格局,表面鍵合極性官能團(tuán)的固定相作用。目前較多的為:NH2—(氨基)、CN—(氰基)特點、DIOL(二羥基,也常做HILIC單獨(dú)分類列出,多用于分離有機(jī)酸製度保障、蛋白質(zhì)等)優化上下。多用于分離光學(xué)異構(gòu)體和反相柱子不能分離的極性比較大的物質(zhì)。
離子交換柱:是以硅烷化硅膠為基質(zhì)最新,以磺化交聯(lián)鍵合強(qiáng)陽(yáng)/陰離子基團(tuán)(磺酸鹽/季銨堿)的固定相發揮重要作用,又分為強(qiáng)酸性、強(qiáng)堿性模樣、弱酸性取得顯著成效、弱堿性等不同規(guī)格。用于分離解離性較強(qiáng)的有機(jī)鹽類化合物快速增長。(注意:不要同離子色譜混淆要求,離子色譜主要是分離無(wú)機(jī)鹽類化合物或某些帶點(diǎn)離子。)
2通過活化、聚合物基質(zhì)柱
聚合物基質(zhì)柱是指采用聚苯乙烯—二乙烯基苯開放以來、聚甲基丙烯酸脂、多孔性微球蛋白等聚合物凝膠作為主要填料的一類色譜柱防控。其相對(duì)于硅膠柱具有更強(qiáng)的疏水性及更寬泛的pH范圍(1.0~14.0)組合運用,但柱效較低,目前主要應(yīng)用于凝膠滲透色譜(GPC)高質量、凝膠過(guò)濾色譜(GFC)及分子排阻色譜(MEC)研究與應用。主要用于分離蛋白質(zhì)類等大分子化合物。
3迎難而上、其他無(wú)機(jī)物填料柱
這類色譜柱于特殊用途有效保障,主要有石墨化碳、氧化鋁(Al2O3)更高效、氧化鋯(ZrO2)等填料稍有不慎。不需要進(jìn)行表面改性探索,其自身表面即可對(duì)各類化合物有強(qiáng)保留∪鎱f議?稍谌我鈖H(氧化鋁除外融合,不能大于12.0)及高溫度(可達(dá)100℃)下使用。其中相結合,石墨化碳填料柱能分離多種化合物提升,主要用于分離幾何異構(gòu)體;氧化鋁柱剛性強(qiáng),柱床穩(wěn)定相關性,可分離多種化合物且多用于制備色譜;氧化鋯柱較氧化鋁柱有更強(qiáng)的pH適用范圍及能耐受更高的溫度競爭力,但其應(yīng)用尚待進(jìn)一步研究。