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簡(jiǎn)要描述:Cellulose DE-52 DEAE 纖維素 DE-52(1)DE52纖維素共同。(2)HCl;NaOH;0.01~0.05mol/L,pH8.0 PB推進一步;0.01mol/L探索創新,pH8.6 Tris-Cl;0.5mol/L NaCl帶動擴大。(3)待純化標(biāo)本:雜交瘤腹水或培養(yǎng)上清前來體驗,免疫血清或飽和硫酸銨粗提品。(4)1.5×50cm 層析柱實現了超越;透析袋發揮重要帶動作用;紫外分光光度計(jì)及其他透析和層析所需的試劑和器材
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Cellulose DE-52 DEAE 纖維素 DE-52
產(chǎn)品信息:
纖維素DE-52提取法純化多克隆抗體
該法提取IgG簡(jiǎn)便管理,既可小量提取廣泛關註,也可大量制備。
1.批量提取法 稱取DEAE-纖維素(DE52)50g,置于1000ml燒杯中顯示,先以蒸餾水漂浮除去細(xì)顆粒善於監督,再經(jīng)酸堿處理后,用0.01~0.05mol/L豐富內涵,pH8.0左右的磷酸鹽緩沖液(PB)平衡數據。將水分抽干,或用布氏濾斗(內(nèi)放兩層濾紙)過濾就能壓製,收集濕纖維素邁出了重要的一步,以降低其離子強(qiáng)度。按1ml血清加濕重5g DE52發揮,經(jīng)過充分?jǐn)嚢杵放?,?℃吸附1h。上清液可再如此處理一次設施,即獲得較純的IgG節點。該法提取IgG簡(jiǎn)便,既可小量提取要求,也可大量制備。
2.Tris-Cl離子交換層析法(Ion-exchange chromatography)
【材料和試劑】
(1)DE52纖維素。
(2)HCl開放以來;NaOH等形式;0.01~0.05mol/L,pH8.0 PB組合運用;0.01mol/L的特點,pH8.6 Tris-Cl;0.5mol/L NaCl至關重要。
(3)待純化標(biāo)本:雜交瘤腹水或培養(yǎng)上清著力提升,免疫血清或飽和硫酸銨粗提品。
(4)1.5×50cm 層析柱建設項目;透析袋動手能力;紫外分光光度計(jì)及其他透析和層析所需的試劑和器材。
【操作步驟】 Cellulose DE-52 DEAE 纖維素 DE-52
(1)DE52纖維素的處理:DE52經(jīng)酸傳遞、堿處理充分,0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl平衡經過。
(2)裝柱:將層析柱固定于滴定架上帶來全新智能,柱底墊一圓形尼龍紗,出口接一細(xì)塑料管并關(guān)閉出水核心技術體系。將浸泡于0.01mol/L自主研發,pH8.6 Tris-Cl中的DE52沿玻璃棒倒入柱中力度,待DE52自然沉降3~5cm高時(shí),吸除0.01mol/L意向,pH8.6 Tris-Cl持續發展,或松開出水口螺旋夾,控制流速1~2ml/min系統性,同時(shí)連續(xù)加入DE52至所需高度合作。待DE52*沉降后,柱面放一圓形濾紙片損耗。
(3)平衡:松開出水口螺旋夾勇探新路,以0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl平衡形式,控制流速為15滴/min擴大,待流出液與洗脫液之pH值達(dá)到*時(shí),停止平衡便利性。
(4)待提取樣品的準(zhǔn)備:將蛋白裝入透析袋里拓展應用,置4℃冰箱,對(duì)0.01mol/L pH8.6 Tris-Cl透析實事求是。
(5)加樣、洗脫與收集:用吸管吸去柱面液體行動力,以毛細(xì)吸管沿柱壁加入樣品結構,樣品體積相當(dāng)于柱床體積的1%~2%,蛋白濃度為50~70mg落到實處。啟開出水口螺旋夾使樣品緩慢進(jìn)入柱床內(nèi)效果,并用少量洗脫液清洗柱壁;待液體進(jìn)入柱床后營造一處,以0.01mol/L服務水平,pH8.6 Tris-Cl洗脫,控制流速為14~16滴/min保供。分部收集器收集更合理,紫外監(jiān)測(cè),或人工收集適應性,以紫外分光光度計(jì)分別測(cè)定每管280nm OD值顯著,描繪洗脫液峰。
(6)濃縮:將洗脫液的280nm OD上峰段與下峰段各管分別合并更優美,裝入透析袋需求,以PEG濃縮至所需體積。
Tris-PO4離子交換層析法
該法在上述方法的基礎(chǔ)上稍加改良更為一致,即通過梯度洗脫各方面,可用于血清中IgG和IgM的提取。
【材料和試劑】
(1)DE52纖維素。
(2)待純化標(biāo)本:雜交瘤腹水或培養(yǎng)上清占,免疫血清或飽和硫酸銨粗提品技術的開發。
(3)1.5×50cm 層析柱;透析袋及其他透析和層析所需的試劑和器材真諦所在。
(4)梯度洗脫液包括:0.005 mol/L研學體驗,pH8.6 Tris-PO4;0.055mol/L提供深度撮合服務,pH6.0 Tris-PO4深刻內涵;.5mol/L,pH5.1 Tris-PO4最為突出。
【操作步驟】
(1)蛋白標(biāo)本對(duì)0.005mol/L逐步改善,pH8.6 Tris-PO4透析。
(2)DE52裝柱,并以0.005mol/L落實落細,pH8.6 Tris-PO4平衡。
(3)加樣組成部分,以0.005mol/L深入闡釋,pH8.6 Tris-PO4洗脫,紫外監(jiān)測(cè)直至洗脫液280nm OD回到基線高效化。這一步驟可除去血清中其他蛋白大大提高。
(4)以350ml 0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4洗脫完成的事情,這一步驟可用于純化血清IgG和IgM調整推進。
(5)以125ml 0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4和125ml 0.5mol/L設備,pH5.1 Tris-PO4梯度洗脫橋梁作用,總量收集250ml;重復(fù)步驟(5)促進善治。
(6)根據(jù)280nm峰值合并蛋白峰講故事,透析濃縮和保存同上。
用過的DE52可用0.01mol/L脫穎而出,pH8.6 Tris-Cl和0.5mol/L NaCl系統、0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl梯度洗脫回收積極影響。再用蒸餾水洗至中性方法,加入0.02%疊氮鈉于4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
性狀:干燥細(xì)結(jié)晶或纖維狀
基質(zhì) 高度交聯(lián)纖維素
配基 二乙基氨基乙基
配基密度 40μmol /ml
吸附載量 180mg HSA/ml
填料的顆粒大小 50μm
zui大流速 300cm/h
pH范圍 3-10,在位清洗時(shí)pH范圍可到2-11
化學(xué)穩(wěn)定性 各種緩沖液及鹽進一步提升,0.5M NaOH及醋酸進行探討,8M脲緊密協作,6M鹽酸胍,乙醇管理,異丙醇等
物理穩(wěn)定性 0.1M中性緩沖液中,120℃30min
層析柱裝填
1)組裝柱(如有需要連接裝柱器)切實把製度。
2)取下下柱頭用裝柱緩沖液沖洗柱底適配器優化上下,排除篩網(wǎng)下面的氣泡,將下柱頭安裝
在層析柱底部最新,旋緊調(diào)整旋鈕發揮重要作用,并在層析柱底部保留 1cm 左右高度的液體。
3)用裝柱緩沖液重懸介質(zhì)模樣,制成 50%~75%左右的介質(zhì)懸浮液取得顯著成效。
4)一次性將介質(zhì)倒入柱管中,避免產(chǎn)生氣泡數據顯示。
5)如連接有裝柱器責任,立即往裝柱器中緩慢加入裝柱緩沖液。將適配器或裝柱器上蓋
與層析系統(tǒng)相連接實現。
6)設(shè)定所需流速+持續向好,打開柱下端,啟動(dòng)泵,進(jìn)行壓柱規模設備。
7)柱床穩(wěn)定后保持 30min 以上,關(guān)閉泵和底閥
8)如連接有裝柱器穩步前行,移除裝柱器后連接適配器。
9)調(diào)節(jié)適配器著力提升,使其固定在膠面上 0.5~1cm 處指導,并保證適配器入口充滿液體。
10)打開底閥動手能力,連接泵服務品質,繼續(xù)用設(shè)定的流速(注意壓力不要超過 0.3Mpa)繼續(xù)壓柱
待膠面高度保持不變,標(biāo)記此時(shí)膠面高度
11)暫停機(jī)器充分,關(guān)閉底閥過程,斷開柱頭入口,調(diào)低適配器至膠面下 3~5mm 處融合。封閉
上柱口進一步完善,裝柱完成。
蛋白層析柱/蛋白純化柱(一端柱床可調(diào)提升,螺紋型) | |||||
內(nèi)徑(mm) | 耐壓(bar) | 床層高度(mm) | 床層體積(mL) | 床層高度(mm) | 貨號(hào)(玻璃) |
10 | 5 | 100 | 0-7 | 0-100 | LK10100 |
10 | 200 | 4月15日 | 55-200 | LK10200 | |
10 | 400 | 20-31 | 255-400 | LK10400 | |
10 | 600 | 35-47 | 455-600 | LK10600 | |
10 | 800 | 51-62 | 655-800 | LK10800 | |
10 | 1000 | 67-78 | 855-1000 | LK101000 | |
15 | 5 | 100 | 0-17 | 0-100 | LK15100 |
15 | 200 | 9.7-35.3 | 55-200 | LK15200 | |
15 | 400 | 45-70 | 255-400 | LK15400 | |
15 | 600 | 80-106 | 455-600 | LK15600 | |
15 | 800 | 116-141 | 655-800 | LK15800 | |
15 | 1000 | 151-176 | 855-1000 | LK151000 | |
20 | 5 | 100 | 0-31 | 0-100 | LK20100 |
20 | 200 | 17-63 | 55-200 | LK20200 | |
20 | 400 | 80-126 | 255-400 | LK20400 | |
20 | 600 | 143-188 | 455-600 | LK20600 | |
20 | 800 | 205-251 | 655-800 | LK20800 | |
20 | 1000 | 268-314 | 855-1000 | LK201000 | |
25 | 5 | 100 | 0-49 | 0-100 | LK25100 |
25 | 200 | 27-98 | 55-200 | LK25200 | |
25 | 400 | 125-196 | 255-400 | LK25400 | |
25 | 600 | 223-294 | 455-600 | LK25600 | |
25 | 800 | 321-392 | 655-800 | LK25800 | |
25 | 1000 | 419-490 | 855-1000 | LK251000 | |
37 | 5 | 100 | 0-107 | 0-100 | LK37100 |
37 | 200 | 59-214 | 55-200 | LK37200 | |
37 | 400 | 274-430 | 255-400 | LK37400 | |
37 | 600 | 488-644 | 455-600 | LK37600 | |
37 | 800 | 703-859 | 655-800 | LK37800 | |
37 | 1000 | 918-1074 | 855-1000 | LK371000 | |
50 | 5 | 100 | 0-196 | 0-100 | LK50100 |
50 | 200 | 108-392 | 55-200 | LK50200 | |
50 | 400 | 500-785 | 255-400 | LK50400 | |
50 | 600 | 893-1177 | 455-600 | LK50600 | |
50 | 800 | 1285-1570 | 655-800 | LK50800 | |
50 | 1000 | 1678-1962 | 855-1000 | LK501000 |
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